试验编号252：体内快速雌激素活性试验（REACTIV，体内快速雌激素作用）

Essai rapide d’activité estrogenin vivo(REACTIV, Rapid Estrogen ACTivityInVivo) 25 juin 2024Lignes directrices de l’OCDE pour lesessais de produits chimiques OECD/OCDEL'OCDE autorise l'utilisation de ce contenu aux conditions décrites sur le site :http://www.oecd.org/fr/conditionsdutilisation.1LIGNE DIRECTRICE DE L’OCDE POUR LES ESSAIS DEPRODUITS CHIMIQUESEssai REACTIV (Rapid Estrogen ACTivity In Vivo)1.La présente Ligne directrice relative à l’essaiREACTIV (Rapid Estrogen ACTivity InVivo) décrit un essai aquatique faisant appel à des éleuthéroembryons d’Oryziaslatipes(médaka japonais) transgénique au jour zéro après éclosion (JAE0; voirAnnexe1 pour les abréviations et définitions),dans un format multipuits,afind’identifier les produits chimiques agissant sur l’axe œstrogénique. La méthodeREACTIV a été conçue comme un outil de dépistage assurant un débit moyen pourdes essais à court terme visant à mesurer la réponse d’éleuthéroembryons à desproduits chimiques potentiellement actifs sur l’axe œstrogénique(1). Les modesd’action attestés comme étant couverts par l’essai sont décrits ci-dessous (voir §10).L’essaiREACTIV a pour vocation de permettre une classification des produitschimiques en produits potentiellement actifs ou inactifs sur l’axe œstrogénique, maisn’est pas conçu pour permettre la détermination de valeurs toxicologiques (CSEO ouCEx). L’essaiREACTIV sera placé au niveau3 du cadre conceptuel de l’OCDE pourles essais des perturbateurs endocriniens(2).2.L’espèce sélectionnée pour l’essaiREACTIV est le poisson médaka japonais,Oryziaslatipes(O.latipes). Cette espèce est également utilisée dans un certain nombre deLignes directrices validées de l’OCDE, notamment les suivantes: LD203 (essai detoxicité aiguë chez le poisson;(3), LD210 (essai de toxicité aux premiers stades dela vie chez le poisson;(4), LD212 (essai de toxicité à court terme chez le poissonauxstades de l’embryon et de l’alevin;(5),LD229(essaiàcourt terme dereproduction des poissons;(6)), LD230 (essai de 21jours sur les poissons;(7),LD234 (essai de développement sexuel des poissons;(8), LD240 (étude étenduede toxicité pour la reproduction sur une génération chez médaka;(9), LD251 (essaide détection rapide d’un rapporteur de l’activité de perturbation androgénique;(10)et le Document Guide de l’OCDE No. 379 sur un Esssai de screening anti-androgenicsur medaka juvenile (JAMASA) (11).3.L’essaiREACTIV repose sur la transcription et utilise une lignée transgénique demédaka porteuse de la construction génétiquechgh-gfp. La lignée transgéniquechgh-gfputilisée dans l’essaiREACTIV est porteuse de 2.047kb du promoteur dugène choriogénineH du médaka, immédiatement en amont du codon d’initiationinduisant l’expression de la séquence codante de la protéine fluorescente verte (GFP,Green Fluorescent Protein). L’expression du transgènechgh-gfps’observe dans le © OCDE (2024)INTRODUCTION OECD/OCDE2foie du médaka en réponse à l’activation de la signalisation de l’axe œstrogénique.On observe également une expression ectopique noninductible de la GFP danscertaines cellules du cœur et de la tête aux stades éleuthéroembryonnaires. Celafournit une confirmation visuelle du fait que les alevins en cours de développementsont transgéniques.4.Il a été constaté que la région promotrice présente dans le transgène contient deséléments de réponse aux œstrogènes (ERE,Estrogen Response Elements) putatifsetque l’expression du transgène est considérablement modulée en présenced’agonistesou d’antagonistes des récepteurs desœstrogènes(ER,EstrogenReceptors)ainsi que de composés induisant ou inhibant les enzymesstéroïdogéniques(12)(13)(1).5.Lesgènes de la choriogénine,comme la vitellogénine,sont nécessairesàlaproductiondesœufs chez les poissons.Leur expression est stimulée par lasignalisation de l’axe œstrogénique. À l’étape terminale de la signalisation de l’axeœstrogénique, l’expression des gènes de la choriogénine et de la GFP dans la lignéedemédaka chgh-gfp représente les effets globaux ou nets des facteurs tantendogènesqu’exogènes modifiant la signalisation de l’axeœstrogénique(changements dans la production, le transport, le métabolisme et l’excrétion deshormones ainsi que dans l’activation et l’inhibition des ER).6.Avantde pratiquer l’essaiREACTIV,le laboratoire vérifiera qu’il dispose descertifications éventuellement requises par la réglementation locale sur l’utilisationd’organismes transgéniques. L’essaiREACTIV doit être réalisé uniquement sur lalignéetransgénique chgh-gfp utilisée pour l’élaboration de la présente Lignedirectrice, qui est disponible dans le commerce (OCDE, Rapport de validation del’essaiREACTIV).L’utilisation d’une autre lignée transgénique basée sur lepromoteur du gène choriogénineH induisant l’expression de la GFP ou d’un autregène rapporteur suppose une validation complète par l’OCDE afin d’adapter lescritères de validation, l’analyse statistique et les seuils de fluorescence ainsi que lediagramme de décision. C’est pourquoi d’autres lignées transg