第442E号论文：体外皮肤敏感性：体外皮肤致敏论文对树突细胞在毒理学中的激活及其对皮肤致敏的影响至关重要

sur l’événement clé relatif à l’activationdes cellules dendritiques dans la voietoxicologique impliquée dans les effetsindésirables pour la sensibilisationcutanée 25 juin 2024Lignes directrices de l’OCDE pour les essaisde produits chimiques OECD/OCDEL'OCDE autorise l'utilisation de ce contenu aux conditions décrites sur le site :http://www.oecd.org/fr/conditionsdutilisation.LIGNE DIRECTRICE DE L’OCDE POUR LES ESSAIS DEPRODUITS CHIMIQUESEssai de sensibilisation cutanée in vitro portant sur l’événement clé relatif àl’activation des cellules dendritiques dans la voie toxicologique impliquée dansleseffets indésirablesINTRODUCTION GENERALELigne directrice pour un essai fondé sur l’événement clé relatif à l’activation des cellules1. Un sensibilisant cutané est une substance qui provoque une réponse allergique suite à un contact aveclapeau, selon la définition du Système général harmonisé de classification et d’étiquetage des produitschimiques des Nations Unies (SGH) (1). Les principales phases du processus biologique de sensibilisationcutanée font l’objet d’un consensus général. Lesconnaissances dont on dispose sur les mécanismeschimiques et biologiques associés à la sensibilisation cutanée sont résumées sous la forme d’une voietoxicologique impliquée dans les effets indésirables (AOP, Adverse Outcome Pathway) (2) allant del’événement moléculaire initiateur jusqu’aux effets indésirables sur la santé que sont la dermatite decontact allergique, en passant par les étapes intermédiaires. Dans le cas présent, l’événement moléculaireinitiateur (le premier événement clé) est l’établissement d’une liaison covalente entre des substanceschimiques électrophiles et les centres nucléophiles des protéines de la peau. Le deuxième événement clésurcet AOP se déroule dans les kératinocytes et comprend des réponses inflammatoires et deschangements d’expression génique, liés à des voies de signalisation cellulaire spécifiques telles que lesvoies dépendant de l’élément de réponse antioxydant/électrophile (ARE, Antioxidant Response Element).Le troisième événement clé est l’activation des cellulesdendritiques (DC), habituellement évaluée d’aprèsl’expressionde marqueurs de surface spécifiques de la cellule,les transcriptions génomiques,leschimiokineset les cytokines.Le quatrièmeévénement cléest la prolifération et l’activation deslymphocytes T, évaluée indirectement par l’essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques (ELGL)2. La présente ligne directrice (LD) décrit les essais in vitro portant sur les mécanismes de l’événement clérelatif à l’activation des cellules dendritiques dans l’AOP sensibilisation cutanée (2). La LD comprend desméthodes d’essai utilisées pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants cutanés, selonLes méthodes décrites dans la présente LDsont les suivantes :•test d’activation de la lignée cellulaire humaine (h-CLAT),•test d’activation de la lignée cellulaire U937 (U-SENS™)•essai par gène rapporteur de l’interleukine 8 (essai IL 8 Luc) 442EAdoptée:30juin2022Corrigée: 25 juin 2024 © OCDE (2024)dendritiqueschez la souris (3).le SGH de l’ONU (1). OECD/OCDE2•détection génomique rapide des allergènes (GARD™) pour l’évaluation des sensibilisants cutanésFondements et principes des méthodes d’essai inclues dans la Ligne directrice d’essaifondé sur les4. Traditionnellement, l’évaluation de la sensibilisation cutanée a fait appel à l’expérimentation animale.Les méthodes classiques qui utilisent un cobaye–le test de maximisation chez le cobaye (GPMT) deMagnusson et Kligman et le test de Buehler (LD 406) (4)–portent sur les phases d’induction etd’élicitation de la sensibilisation cutanée. Les essais chez la souris–l’ELGL (LD 429) (3) et ses deuxvariantes n’utilisant pas d’isotopes radioactifs, l’ELGL: DA (LD 442A) (5) et l’ELGL : BrdU-ELISA (LD442B) (6)–tous trois portant sur la réponse à l’induction exclusivement, se sont également imposés, carils présentent l’avantage, par rapport aux tests sur le cobaye, de préserver davantage le bien-être animalet de fournirune mesure objective de la phase d’induction de la sensibilisation cutanée.5.Des méthodes d’essai de type mécanistique ont été adoptées afin d’aider à évaluer le potentiel desensibilisation des produits chimiques. Il s’agit de méthodes in chemico (LD 442C de l’OCDE ; essai deliaisondirecte sur la réactivitépeptidique portant sur le premierévénement cléde l’AOP de lasensibilisation cutanée) (7) et in vitro (LD 442D de l’OCDE portant sur le deuxième événement de l’AOP6. Il a été signalé que les sensibilisants cutanés induisent l’expression de marqueurs membranairesassociés à l’activation des DC (2) tels que CD40, CD54, CD80, CD83 et CD86, induisent aussi descytokines pro-inflammatoires telles que IL-1βet TNF-α,ainsi que plusieurs chimiokines parmi lesquelles IL8 (CXCL8) et CCL3 (9) (10) (11) (12).Les méthodes décrites dans la présente LD permettent de quantifiersoitles variations d’expression de marqueurs de surface associés au processus