第442D号论文：体外皮肤敏感性：体外皮肤致敏研究在有害物质的毒性作用下，对角质形成细胞的激活具有重要意义

sur l’événement clé ’relatif à l’activation deskératinocytes dans la voie toxicologiqueimpliquée dans les effets indésirables 25 juin 2024Lignes directrices de l’OCDE pour les essaisde produits chimiques OECD/OCDE© OCDE (2024)L'OCDEautorisel'utilisationdececontenuhttp://www.oecd.org/fr/conditionsdutilisation.LIGNE DIRECTRICE DE L’OCDE POUR LES ESSAISDEPRODUITS CHIMIQUESEssais de sensibilisation cutanéein vitroportant sur l’événement clé ’relatif àl’activation des kératinocytes dans la voie toxicologique impliquée dans leseffets indésirablesINTRODUCTION GÉNÉRALELigne directrice pour un essai fondé sur l’événement clé relatif à l’activation deskératinocytesUn sensibilisant cutané est une substance qui provoque une réponse allergique dufait d’un contact répété avec la peau, selon la définition du Système général harmonisé declassification et d’étiquetage des produits chimiques des Nations Unies (SGH) (1).Les principalesphases du processus biologique de sensibilisation cutanée font l’objet d’un consensus général.Les connaissances dont on dispose actuellement sur les mécanismes chimiques et biologiquesassociés à la sensibilisation cutanée sont résumées sous la forme d’une voie toxicologiqueimpliquée dans les effets indésirables (AOP, Adverse Outcome Pathway) (2) allant de l’événementmoléculaire initiateur jusqu’aux effets indésirables sur la santé que sont les dermatites de contactallergiques, en passant par les étapes intermédiaires. Cette AOP concerne les produits chimiquesqui réagissent avec les thiols (donc la cystéine) et les amines primaires (donc la lysine), commeles substances organiques. Dans le cas présent, l’événement moléculaire initiateur(le premierévénement clé) est l’établissement d’une liaison covalente entre des substances chimiquesélectrophiles et les centres nucléophiles des protéines de la peau. Le deuxième événement clé del’AOP se déroule dans les kératinocytes et comprend des réponses inflammatoires et deschangements d’expression génique, liés à des voies de signalisation cellulaire spécifiques tellesque les voies dépendant de l’élément de réponse antioxydant/électrophile (ARE, AntioxidantResponseElement).Le troisièmeévénement cléest l’activation des cellules dendritiques,habituellement évaluée d’après l’expression de marqueurs de surface spécifiques de la cellule, leschimiokines et les cytokines. Le quatrième événement clé est la prolifération des lymphocytes T.Laprésente Ligne directrice(LD)décrit les essais in vitro portant sur lesmécanismes du deuxième événement clé de l’AOP sensibilisation cutanée, à savoir l’activationdes kératinocytes (2). Cette LD comprend des méthodes d’essai utilisées pour aider à distinguerlessensibilisants des non-sensibilisants cutanés,selon le SGH de l’ONU(1).Elle décritactuellementtroisméthodes d’essai,parmi lesquelles deux méthodes d’essai ARE-Nrf2 luciféraseinvitroet une méthode d’essai fondée sur la quantification de l’expression génique:•la méthode d’essai ARE-Nrf2 luciférase KeratinoSensTM(appendice IA) ;•la méthode d’essai ARE-Nrf2 luciférase LuSens (appendice IB);•la méthode d’essai de sensibilisationcutanéeEpiSensA (appendiceIC). auxconditionsdécritessurlesite:11.2. OECD/OCDE2Cestrois méthodes d’essaisont jugées valides sur le plan scientifique. La méthoded’essai KeratinoSensTM a d’abord fait l’objet d’une étude de validation suivie d’un examen par despairs indépendant réalisé par le Comité scientifique consultatif (ESAC) du Laboratoire de référencede l’Union Européenne pour la validation de méthodes alternatives (EURL ECVAM). L’EURLECVAM ayant formulé des recommandations positives, la méthode KeratinoSensTMest considéréecomme la méthode de référence validée (MRV)en ce qui concerne les méthodes d’essai ARE-Nrf2 luciférase(3) (4) (5) (6). La méthode d’essai LuSens a été soumise à une étude de validationaxée sur les normes de performance, à l’issue de laquelle elle a été examinée par l’ESAC qui aémis un avis positif (7) (8) (9) (10).La méthode EpiSensA a fait l’objet d’études de validation (11)suivies d’un examen indépendant par des pairs (12) réalisé par le Centre japonais pour la validationdes méthodes de substitution (JaCVAM). Elle est considérée comme une MRV en ce qui concerneles méthodes d’essai quantifiant les modifications de l’expression des gènes marqueurs associésà l’activation des kératinocytes (ATF3,IL-8,GCLMetDNAJB4) au moyen de la réaction depolymérisationen chaîne(PCR)quantitative après transcription inverse sur des modèlesd’épiderme humain reconstitué (EhR). Il existe aussi un ensemble de normes de performance (13)pour ce type de méthode afin de faciliter la validation et l’évaluation de méthodes d’essai sur EhRRappel des faits et principes relatifs aux méthodes d’essai incluses dans leslignes directrices fondées sur les événements clésHistoriquement,l’évaluation de la sensibilisation cutanée a fait appelàl’expérimentationanimale.Les méthodes classiques qui utilisent un cobaye–le test demaximisation chez le cobaye (GPMT) de Magnusso