世卫组织 BS 2023.2461 第二个世卫组织甲胎蛋白国际标准 （ 人类 ， 天然 ）

世界卫生组织第二个甲胎蛋白国际标准（人类，天然） 凯瑟琳·帕特里奇、梅兰妮·摩尔、埃莉诺·阿特金森、彼得·里格斯比和本·考珀医药和保健产品监管机构，Blanche Lane，South Mimms，Potters Bar，EN6 3QG，英国*研究协调员(katherine. partridge @ mhra. gov. uk) 注: 本文件是为了征求对其中包含的建议的意见和建议，然后由生物标准化专家委员会(ECBS)审议。2023年10月2日并应致函世界卫生组织，瑞士日内瓦1211，注意：技术标准和规范（TSS）。评论也可以电子方式提交给负责官员：Ivana Knezevic博士电子邮件: knezevici @ who. int. ©世界卫生组织2023 保留所有权利。世界卫生组织的出版物可在世卫组织网站（www. who. int）上获得，也可以从世界卫生组织出版社购买，地址：瑞士日内瓦1211阿皮亚大道20号（电话：41 22 791）3264；传真：+ 41 22 791 4857；电子邮件：bookorders @ who. int)。 复制或翻译世卫组织出版物— —无论是出售还是非商业发行— —的许可请求应通过世卫组织网站向世卫组织出版社提出: (http: / /www. who. int / about / licensing / copyright _ form / en / index. html)。 本出版物中使用的名称和材料的呈现并不意味着世界卫生组织对任何国家、领土、城市或地区或其当局的法律地位或对其边界或边界的划定表示任何意见。地图上的虚线代表可能尚未完全一致的近似边界线。 提及特定公司或某些制造商的产品并不意味着它们得到世界卫生组织的认可或推荐，而不是未提及的其他类似性质的产品。除错误和遗漏外，专有产品的名称以首字母大写字母区分。 世界卫生组织已采取所有合理的预防措施来验证本出版物中包含的信息。但是，发布的材料正在分发，没有任何明示或暗示的保证。 WHO / BS / 2023.2461第10页2 解释和使用材料的责任在于读者。在任何情况下，世界卫生组织都不对因使用材料而造成的损害负责。只有指定的作者对本出版物中表达的观点负责。 Summary 在编码22 / 216的安瓿中制备人甲胎蛋白(AFP)的候选制剂。与4个国家的10个实验室组织了一项合作研究。候选制剂是通过针对当前IS的免疫测定以IU单位分配的值。这也提供了关于候选标准的免疫反应性及其作为校准人AFP免疫测定的国际标准的适用性的确证数据。这项研究还旨在评估AFP免疫测定中候选制剂22 / 216的可交换性及其长期稳定性。 向研究参与者提供了候选IS，22 / 216和当前IS，72 / 225的安瓿，以及人血清样品。共有9个实验室进行了免疫测定，包括20种不同的方法，其中一些方法是在多个实验室进行的（总共进行了24种实验室测试方法）。一个实验室没有及时返回数据以将数据纳入统计分析。所有实验室（除了中国的实验室）还平行测量了多达18个人血清样品，稀释度为22 / 216和72 / 225。 收到的数据表明候选IS 22 / 216具有免疫反应性，并且在研究中包含的免疫测定中表现与第一个IS72 / 225相似。这表明在引入替代IS后将实现AFP测量的连续性。数据进一步用于指定7800IU /安瓿至候选IS，22 / 216，相对于当前IS，77 / 225。 还使用“校准有效性”方法分析免疫测定结果以评估标准品与患者样品的可交换性。研究的结果是混合的，包括良好的，部分和差的可交换性候选IS，22 / 216，在测试的方法范围内。血清样品的所有研究偏倚估计显示，当相对于任一候选IS报告时，在较高的AFP浓度下，实验室和方法的协调性略有改善（偏差较小），但在较低的AFP浓度下协调性较差。 在+ 4、+ 20、+ 37和+ 45 ° C的高温下储存的加速热降解(ATD)样品在储存32周后通过免疫测定进行分析。数据表明22 / 216具有良好的稳定性，在- 20 ° C下储存时估计每年的效力损失为0.07% 总之,来自免疫测定估计、可交换性评估和ATD研究的结果表明,候选IS (22 / 216)适合作为第一IS(72 / 225)的替代,用于继续校准用于测量AFP的免疫测定方法。 因此，建议将编号为22 / 216的安瓿中的候选制剂确定为甲胎蛋白的第二个国际标准（人类，本地）与分配的内容7800IU /安瓿。 WHO / BS / 2023.2461第10页4 Introduction 甲胎蛋白（AFP）是血清白蛋白家族中的70 Da糖蛋白。成人的AFP水平通常较低，在怀孕的头三个月和第二个三个月，或者在某些癌症如肝癌中，AFP水平也会增加。通过免疫测定法测量AFP已广泛用于监测疾病状态，例如慢性活动性肝炎和肝细胞癌，以及出生缺陷，例如无脑，脐膨出和脊柱裂。 存在多种可商购的AFP免疫测定方法,包括手动ELISA和自动化平台测定,其中大部分可追溯到用于AFP的第一WHO国际标准(IS)。用于AFP，人，免疫测定（编码72 / 225或AFP）的第一个WHOIS成立于1975年，并以国际单位（100, 000 IU /安瓿）分配了效力。此后，它已被广泛用于AFP免疫测定测量的校准和协调[1 - 3]。尽管IS以IU为单位，但AFP测量值通常以SI单位报告，使用已建立的转换因子（1 IU = 1.21 g）[3]。 第一个IS的库存现在已经耗尽，需要开发替代IS。AFP的新制剂由高度纯化的AFP从人血清中稀释，已填充到安瓿（编码22 / 216）作为第二个WHO IS的候选，按照WHO推荐的程序[4]。现在，已与专家实验室进行了合作研究，以帮助评估该替代标准，并根据第一个WHO IS进行校准。 合作研究还旨在证明候选标准适合作为国际标准来校准人类AFP免疫测定，通过确认候选标准的免疫反应性，22 / 216，证明了候选和当前IS之间AFP测量的连续性，并评估了候选IS与患者样品的可交换性。此外,将通过加速热降解(ATD)研究来评估候选标准品的长期稳定性。 目标 本文的研究目的如下: 根据第一个WHO IS，通过免疫测定，以国际单位（IU）评估分配候选标准22 / 216。评估候选标准22 / 216的适用性，以作为第二WHO IS校准AFP免疫测定，针对现行标准72 / 225。为了评估候选标准品22 / 216与天然人血清样品的可交换性。估计候选标准品22 / 216在加速热降解后的长期稳定性。 材料和方法 散装材料和加工 具有高甲胎蛋白(AFP)含量的高度纯化的人脐带血清的批量制剂购自LeeBiosoltios (MO, USA)。将材料作为一个小瓶提供,其含有约13.4 mL的0.2μm过滤溶液在tris缓冲盐水(pH7.5,具有0.1%叠氮化钠)中的1.5 mg / mL溶液(目录号: 105 - 11,批号: 02H6279)。两种材料都是针对HBsAg，HCV，HIV -1 / HIV - 2测试的病毒标记，发现是阴性或非反应性的。将大量AFP溶液在正常人血清中稀释至约10,000IU / mL (产品编号: H4522,批号: SLC8148)。将该溶液以1.0 mL等分试样分配到2.5 mL玻璃安瓿中,冻干并在氮气下密封。 产品特性 2022年10月28日，共填充了1145个安瓿。该批料的平均填充质量为1.010 g (CV0.179%, = 50),平均干重为0.0892 g (CV0.63%, = 5)。平均残留水分为0.235% (CV 12.35%, = 12),平均氧气顶空为0.32%(CV 33.88%, = 12)。未检测到微生物污染。在进行产品表征测试之后,总共剩余1037个安瓿并且可供使用。 协作研究设计 参与者 4个国家的9个实验室参加了这项研究，并在表1中按国家字母顺序列出。在整个研究过程中，每个参与实验室都有一个代码号。代码号是随机分配的，不反映列表的顺序。 样品 人类血清和血浆样品购自First Link UK Ltd、AbBaltis和TCS Biosciences。 Methods 参与者被要求测定候选IS，22 / 216，当前IS，72 / 225和18个血清样品（取决于测定的动态范围，不是所有实验室都测试了所有血清样品，在中国测试的所有方法也没有评估可交换性）使用常规在他们的实验室中使用的免疫测定。要求进行三个独立的测定,每个测定使用新鲜的安瓿/样品。然而,由于库存有限,仅提供当前IS (72 / 225)的单个安瓿用于包含在3个测定中。因此，有人要求。 实验室在同一天或随后几天完成了独立的测定，以最大限度地减少储存时间。研究方案（附录2）中提供了样品制备和分析的详细指南。在进行免疫测定的9个实验室中，使用了20种不同的方法，包括自动和手动ELISA方法的组合：Diasori Liaiso ® XL，Roche Elecsys ® e601和e801，SiemesIMMULITE ® 2000，Abbott Architect i2000，Becma Colter Access 2，Atobio Atolmo A2000，Dari DR -CL2000，Hoapi AE一些方法在多个实验室中进行了测试，而一些实验室执行了多种方法，总共产生了24种实验室执行的方法。 对候选IS的稳定性评估，22 / 216 进行了加速热降解（ATD）研究，以预测候选IS的长期稳定性，22 / 216。安瓿在升高的温度下储存（4，20， + 37和+ 45oC)并在32周后进行分析。通过免疫测定分析样品的AFP含量,与储存在- 20oC的参考样品进行比较。由于数量有限,并且在合作研究的后期可获得, ATD样品分析仅在单个实验室中在单个平台上进行。 统计分析 候选IS的值分配，22 / 216 对于所有测定,候选的第二IS22 / 216相对于第一IS72 / 225的效力通过平行线分析与测定响应的对数转换来估计。使用EDQM软件CombiStats 6.1版[5]进行计算。如果相关r值超过0.99并且斜率比的90%置信区间在0.90 - 1.11的范围内,则分析被接受。组合来自所有有效测定的相对效力估计以产生每个实验室的半加权几何平均值(GM)估计,其中这些实验室平均值用于计算候选标准的总体未加权GM。已使用几何变异系数(GCV = (10s - 1) × 100%,其中s是对数的标准偏差。10转换后的估计)。 可交换性评估 通过“校准有效性”方法评估WHO制剂与患者样品的可交换性[6]。该分析使用从报告的估计值和使用WHO制剂的拟合剂量反应数据相对于22 / 216重新计算的估计值计算的偏差值。偏差被定义为实验室几何平均样本估计值,作为样本的研究中值的% (用作用于该分析目的的样本目标值)。 WHO / BS / 2023.2461第10页8 为了得出可接受的偏差范围（仅用于本研究的分析），在每个实验室内计算对数转换偏差值的标准偏差，并得出合并值，sP，是在所有实验室中计算的。然后将代表最大可接受偏差的标准设置为± 3sP. 稳定性评估 来自加速热降解（ATD）研究样品的免疫测定数据用于拟合阿伦尼乌斯方程，将降解速率与绝对温度相关，假设一阶衰减[7]，从而预测在- 20℃储存时的降解速率。 Results 返回的数据和测定有效性 免疫测定数据由9个实验室返回，他们总共进行了74个独立测定。从9个实验室中的8个返回的测定包括试剂盒对照/标准品，并符合相关的验收标准。然而，在MHRA中心分析后，以下运行或测定被排除在进一步分析之外： 实验室10免疫测定使用Roche Elecsys 801平台进行。不幸的是，参与者仅收到样品A（AFP 72 / 225的当前IS），直到返回数据