研报正文总结
引言
本指南描述了一种使用 Daphnia magna 进行的短期筛选方法（JHASA），用于检测具有类似激素 juvenile (JH) 活性的化学品。该方法基于 D. magna 原生雌性个体在暴露于 JH 或其类似物时会产生雄性后代的现象。JHASA 是一种短期筛选方法，旨在评估 D. magna 原生雌性个体产生雄性后代的能力，并将其与 OECD 测试指南 211（D. magna 繁殖试验）中描述的长期繁殖试验进行比较。
原理
JHASA 方法基于 JH 信号通路对 D. magna 性别决定的影响。在自然环境中，D. magna 雌性个体在暴露于特定环境刺激（如光周期缩短、温度降低、食物减少或种群密度增加）时会产生雄性后代。此外，JH 或其类似物也能诱导雄性后代的产生。JHASA 方法通过在短期（约 7 天）内观察 D. magna 雌性个体产生雄性后代的情况，来筛选具有类似 JH 活性的化学品。
试验方法
试验装置
- 使用玻璃或化学惰性材料制成的容器进行试验。
- 需要的设备包括：溶氧计、恒温设备、pH 计、水硬度计、光照和光强度测量设备。
试验生物
- 使用 D. magna Straus 作为试验生物。
- 推荐使用不易在对照条件下产生雄性后代的克隆，如 NIES、Clone A 或 DHI。
- 试验开始时使用 10-17 天的成年雌性个体。
试验介质
- 推荐使用完全定义的介质，如 Elendt M4 或 M7，以避免使用难以表征的添加剂并提高实验室间标准化的可能性。
- 介质应满足特定的理化指标，包括溶解氧浓度、pH 值、水硬度和碳有机总量 (COT)。
试验操作
- 将雌性个体单独分配到含有 50-100 mL 介质的容器中。
- 设置至少三个浓度梯度的试验组和一个对照组（纯水或溶剂）。
- 试验期间不进行通气。
- 试验持续约 7 天，直到所有存活的 D. magna 产生第二代后代。
饲料
- 使用活的单细胞藻类作为主要食物来源，推荐浓度范围为 0.1-0.2 mg C/Daphnia/天。
- 可选地，每天添加 0.05 mL 的酵母-Cerophyll-鲑鱼饲料 (YCT)。
光照和温度
- 光照周期为 16 小时光照，8 小时黑暗，光照强度不超过 15-20 μE·m⁻²·s⁻¹。
- 试验温度为 18-22 °C，且在试验期间保持稳定。
观察指标
- 记录每只雌性个体产生的后代数量和性别。
- 观察雌性个体的蜕皮情况、未受精卵和死亡后代。
- 记录雌性个体的死亡情况。
分析方法
- 测定试验组中化学品的浓度，并确保其在整个试验期间保持稳定。
- 测量介质的理化指标，包括溶解氧浓度、温度和 pH 值。
- 计算每个试验组的雄性后代比例，并与对照组进行比较。
结果和报告
- 试验结果主要关注第二代后代的雄性比例。
- 计算每个试验组的平均雄性比例，并与对照组进行比较。
- 如果试验组中观察到雄性后代，则需要使用统计学方法分析结果，以确定其与化学品的浓度之间的关系。
- 试验报告应包含化学品信息、试验条件、结果数据、统计分析方法和结论等内容。
结论
JHASA 方法是一种快速、简便的筛选方法，可以用于检测具有类似 JH 活性的化学品。该方法基于 D. magna 雌性个体在暴露于 JH 或其类似物时会产生雄性后代的现象。通过观察第二代后代的雄性比例，可以初步判断化学品是否具有类似 JH 的活性。如果试验组中观察到雄性后代，则需要进一步进行验证试验，以确定其 JH 活性的强度和机制。
