体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：乙型肝炎病毒核糖核酸（HBV RNA）检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 产品管理类别：第三类 申 请 人 名 称：圣湘生物科技股份有限公司 国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心 目录 基本信息......................................................................................................3一、申请人名称..........................................................................................3二、申请人住所..........................................................................................3三、生产地址..............................................................................................3技术审评概述..............................................................................................4一、产品概述..............................................................................................4二、临床前研究概述..................................................................................6三、临床评价概述....................................................................................12四、产品受益风险判定............................................................................14综合评价意见............................................................................................17 基本信息 一、申请人名称 圣湘生物科技股份有限公司 二、申请人住所 长沙高新技术产业开发区麓松路680号 三、生产地址 长沙高新技术产业开发区麓松路680号 技术审评概述 一、产品概述 （一）产品主要组成成分 本试剂盒包括逆转录、荧光PCR扩增反应试剂，主要组成成分见表1。 备注： 1.不同批号产品的成分之间不可以混用或互换。 2.本试剂盒定量参考品溯源至制造商选定测量程序。 3.自备试验器材：无DNA酶、RNA酶的1.5 mL离心管、0.2 mL PCR反应管；台式离心机；台式振荡混合器；磁珠分离器、各种规格的加样枪及相应Tip头(10μL，200μL，1000μL)。所有的反应管都需经无RNase处理。 4.提取试剂盒使用本公司生产的核酸提取或纯化试剂（湘长械备20150021号）进行核酸提取。 （二）产品预期用途 本试剂盒用于体外定量检测临床血清样本中的乙型肝炎病毒（HBV）RNA。 乙型病毒性肝炎（乙肝）是由乙型肝炎病毒（Hepatitis BVirus, HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病，临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。人感染乙型肝炎病毒（HBV）后，病毒持续未被清除者可能发展为慢性肝炎，如果不进行适当的干预，约15％～40％的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者最终将发生肝硬化、终末期肝病及肝癌。因此，乙型肝炎病毒（HBV）感染者应积极进行抗病毒治疗，并监测其病毒载量变化。本试剂盒通过对经核苷（酸）类似物治疗、乙型肝炎表面抗原浓度低于1500 IU/mL的病例，检测血清中乙型肝炎病毒（HBV）RNA， 用于该人群经核苷（酸）类似物联合干扰素治疗后乙型肝炎表面抗原转阴的提示。 （三）产品包装规格 24人份/盒。 （四）产品检验原理 本试剂盒通过逆转录HBV核酸中的pgRNA，利用针对HBV pgRNA序列设计的一组特异性引物与荧光探针，配以PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现HBV pgRNA的定量检测。 PCR检测体系含有阳性内对照（内标），通过检测内标基因来监测提取核酸中是否具有PCR抑制物，评价核酸提取的质量，避免PCR假阴性。 二、临床前研究概述 （一）主要原材料 1.主要原材料的选择 本产品在制备过程中主要原材料包括引物、荧光探针、dNTPs（T）、Tth DNA Polymerase（Tth酶）、Taq酶、HBV RNA假病毒、HBV RNA内标假病毒等，主要原材料为外购方式获得。申请人选择有资质的供应商提供的原料，通过功能性试验，筛选出最佳原材料和供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。 2.企业参考品和对照品的设置情况 本产品企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、线性参考品、检出限参考品和精密度参考品。参考品采用临床样本和假病毒制备而成。组成如下： 阳性参考品6份（P1～P6）：由含不同乙肝病毒型别（B型、C型、D型）与浓度的6份乙型肝炎病毒核糖核酸（HBVRNA）阳性样本组成。 阴性参考品8份（N1～N8）：N1～N3为正常人乙型肝炎病毒阴性血清样本；N4～N8为种属相近的或引起症状相似的病毒，分别为丙型肝炎病毒（两份）戊型肝炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒阳性样本。 线性参考品8份（L0～L7）：由不同浓度的乙型肝炎病毒核糖核酸（HBV RNA）假病毒组成。经标定的乙型肝炎病毒核糖核酸（HBV RNA）强阳性假病毒，用阴性血清分别稀释至1.0×109copies/mL、1.0×108copies/mL、1.0×107copies/mL、1.0×106copies/mL、1.0×105copies/mL、1.0×104copies/mL、1.0×103copies/mL、1.0×102copies/mL，即企业线性参考品L0～L7。 检出限参考品3份（S1～S3）：来源于1份乙型肝炎病毒阳性血清样本，使用企业线性参考品定值后，用阴性血清稀释至5000 copies/mL，编号为S，使用时用阴性血清分别稀释至100copies/mL，50 copies/mL和25 copies/mL，编号分别为S1，S2和S3。 精密度参考品2份（R1～R2）：经标定的乙型肝炎病毒核 糖核酸（HBV RNA）强阳性假病毒，用阴性血清分别稀释至1.5×104copies/mL、1.5×102copies/mL两个浓度，编号R1和R2。 本产品设置了HBV RNA阴性对照和HBV RNA阳性对照，用于检测过程中试剂盒和仪器的质量控制。此外，PCR检测体系含有阳性内对照（内标），通过检测内标基因来监测提取核酸中是否具有PCR抑制物，评价核酸提取的质量，避免PCR假阴性。 （二）生产工艺及反应体系研究 申请人对生产工艺及反应体系的研究包括核酸提取方法研究、样本用量研究、核酸用量研究；对引物探针离心时间、不同温度和时间复溶等进行优化；对PCR buffer、引物、探针、Taq酶、Tth酶、dNTPs（T）等的用量进行了优化；对HBV RNA反应液、HBV RNA定量参考品、HBV RNA阳性对照及HBVRNA内标在2-8℃不同保存时间进行研究；并对反应条件进行优化，包括逆转录温度、逆转录时间、预变性时间、退火和延伸温度、循环数的选择研究。 申请人通过企业内部研究试验，确定了最佳的生产工艺及反应体系。 （三）分析性能评估 本产品分析性能包括核酸提取方法研究、测量范围、准确度、检出限与定量限、精密度、分析特异性、包容性，申请人提交了三批试剂，在适用机型（ABI7500荧光PCR仪、SLAN-96P 全自动医用PCR分析系统、雅睿MA-6000荧光PCR仪）上的性能评估资料。 1.核酸提取 申请人使用HBV RNA阳性样本，使用圣湘的核酸提取或纯化试剂和凯杰（QIAamp Viral RNA Mini Kit (50)）的提取试剂盒进行对比研究，结果核酸提取或纯化试剂与对照试剂无明显区别，相对提取效率高。 2.测量范围 申请人使用HBV RNA强阳性血清为初始样本，用阴性血清稀释至1.0×109copies/mL～1.0×102copies/mL，分别使用三批质检合格的试剂盒进行检测，结果均符合线性范围的性能要求。 3.准确度 申请人将乙型肝炎病毒RNA检测试剂国家标准品稀释100倍后作为待测样本，分别使用三批质检合格的试剂盒进行检测，结果样本浓度对数值与理论对数值的绝对偏差均不超过±0.5个对数数量级，符合准确度的性能要求。 4.检出限与定量限研究 将已定值的HBV RNA阳性样本用阴性血清进行梯度稀释，分别使用三批质检合格的试剂盒进行检测，确定本试剂盒的最低检出限为50 copies/mL，定量限为100 copies/mL。使用三批质检合格的试剂盒对不同型别（B型、C型、D型）的HBV RNA 阳性样本进行检出限与定量限的验证，结果均符合检出限与定量限的性能要求。 5.分析特异性研究 以正常人乙型肝炎阴性血清，丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒、甲型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、甲型流感病毒、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、HIV、梅毒、痤疮丙酸杆菌、人类疱疹病毒6型及HBV DNA阳性样本作为待测样本，使用三批质检合格的试剂盒在适用仪器上检测，检测结果均为阴性，说明试剂盒具有很好的特异性。 在内源/外源干扰物质研究中，采用三批质检合格的试剂盒，对各种可能的干扰物质进行评价。结果显示血红蛋白（≤2g/dL）、总胆红素（≤28 mg/dL）、甘油三酯（≤3 g/dL）、总IgG（≤40 mg/mL）、干扰素2a（9 ng/mL）、拉夫米定（300μg/mL）、干扰素2b（250 ng/mL）、恩替卡韦（100μg/mL）等对试剂盒的检测结果无影响。 6.精密度研究 选择HBV RNA阴性样本、HBV RNA临界阳性样本、HBVRNA弱阳性样本、HBV RNA强阳性样本作为待测样本，分别使用三批质检合格的试剂盒进行检测，进行为期21天的检测，结果显示三批试剂盒检测HBV RNA阴性样本的阳性检出率均为0%，检测临界阳性检出率均为100%。对于检测弱阳性及强阳性样本，三批试剂盒日间、不同操作者间、不同设备间、不 同试验地点间检测强阳性样本的浓度对数值CV均小于5%；弱阳性样本的浓度对数值CV均小于10%，符合精密度的性能要求。 7.包容性研究 选择不同型别（B型、C型、D型）HBV RNA高、中、低及检出限浓度样本，分别使用三批质检合格的试剂盒进行检测，结果高、中、低浓度样本检测浓度平均对数值的绝对偏差均不超过±0.5个对数数量级，高、中浓度对数值的CV值均不超过5%，低浓度对数值的CV值不超过10%，检出限浓度样本均为阳性，符合包容性的性能要求。 （四）阳性判断值研究 1.阳性判断值研究-准确性部分 选择已确认的HBV RNA B、C、D型阳性样本分别52份、54份、11份和60份临床HBV RNA阴性血清样本，用质检合格的HBV RNA试剂盒进行检测，然后进行ROC曲线分析，确定目标基因检测的Ct阳性判断值为40。 2.阳性判断值研究-有效性部分 本次研究对82位受试者（接受NAS联合干扰素抗病毒治疗，且同时满足HBs